产品目录

保存：2～8℃

百奥莱博推出的1000×拟南芥营养液(KD1122)，也有实验室称为PNS营养液，分为3个组分，2～8℃可储存1年，分别称取3次即可快速配制pH值为5.7的营养液，无需调整pH值。使用方便快捷。
使用方法：
1.根据用量，分别称取相同体积的三种储存液，依次加入1000倍体积的水中，混匀。
2.本品配制完成后pH值为5.7，无需调整。如有特殊要求，可根据要求调整pH值。
3.施入配制好的营养液。
注意事项：
1.大量元素低温储存可能会有析出情况，恢复常温完全溶解即可使用。
2.三种母液不要同时加入，避免产生沉淀。
拟南芥培养方法：
拟南芥生长的适宜温度白天为22℃～24℃，夜温20～22℃，适宜的湿度为60～70%，生长期适宜的光强为150μmol? S-1? M-2(6支36W日光灯下35cm处测得)。幼苗期不耐高光强，可适当遮荫。光质也较重要，应选用植物生长专用的日光灯。拟南芥属于长日照植物，在日照长于12小时下才会开花，一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳。
1.准备育苗培养基：2.29g/L 1/2 MS(KD2594)，Sucrose(KD1089):10g/L，pH5.7，Agar(KD1136):0.7～0.8%.121℃灭菌15分钟，60℃左右在超净台内分装入直径100mm培养皿(25mL)。
2．种子消毒：种子放在1.5mL离心管中，加入1mL的种子消毒液(2% NaClO(市售10%溶液)和0.1% Triton-X100)，消毒10min(移液器反复吸吹)，用无菌水洗5次以上(移液器反复吸吹)。
3．点种：种子里可多加些水，用移液器吸取种子，均匀铺到培养皿上，可根据需要选择种植的密度(一般不超过30株，不要太密，否则根缠在一起不好移苗)，用移液器吸除培养基表面上的水，并置于超净台内吹干培养皿表面上的水，密封盖子，4℃暗处理两天后(春化)，移到光照培养箱(22℃，光周期12h)，两周后再移苗。若种子较密，光照培养箱中生长1周则要移苗，且需适当遮荫。
4．移苗：将蛭石与珍珠岩按3:1的比例混好作为基质，装入营养钵，将营养钵放入不透水的平底塑料育苗盘，在育苗盘中加水至3cm高，水就会通过营养钵的底孔渗入，待基质湿透即可移苗。用镊子轻轻从培养皿中连根拉出小苗，把根平放在蛭石表面，用镊子把根轻轻压入基质内，移苗后用保鲜膜覆盖营养钵3～4天。从苗期直至开花，每隔2～3天浇一次水，始终保持育苗盘内有1-3cm的水层，整个生长期浇3～4次拟南芥营养液(KD2095)。在收种期，不要浇水，保持育苗盘干燥。
5．收种：在种荚变黄，变干时收种。将种子抖落容器内，收集后用筛网除去杂质，将种子装入小纸袋中，标记好，置于干燥的环境中待种子进一步干燥后，封存于1.5mL离心管。
拟南芥的转化方法：
渗透培养基配制：2.29g/L 1/2MS(大量元素减半)；5%蔗糖；0.5% MES；用KOH调至pH5.7；再加：10μL/L的6-BA母液(1mg/mL，乙醇溶解)；200μL/L Silwet L-77(在蔗糖溶解后加入，否则蔗糖很难溶解)。经转化的拟南芥，种子收获后需在相应的抗性平板上筛选转化子。
1.制备好已转化了相应质粒的农杆菌菌液10mL，转入200mL大瓶过夜培养，农杆菌液OD600在1.2-1.6即可。
2．室温5000rpm离心15分钟。
3．弃上清，将农杆菌沉淀悬浮于相应体积的渗透培养基里，OD600在0.8左右为宜。
4．直接将拟南芥的花浸入农杆菌悬浮液，持续几秒钟，取出再浸入，反复3～5次。浸染后的植株平放在带有盖子的育苗盘中，或者用保鲜膜盖好，以保持湿度。移入恒温室避光培养24小时，第二天揭膜，正常光照培养。
转化子的筛选：
1．种子消毒：用种子消毒液(2% NaClO和0.1% Triton-X100)处理10分钟(移液器反复吸吹)；然后用无菌水洗5次(移液器反复吸吹)。
注意：消毒时间不宜过长，否则影响种子发芽。
2．处理后的种子用移液器均匀涂布在固体筛选培养基表面。不宜过密，切忌将种子堆叠在一起。如种子特别容易污染，可在固体筛选培养基中加入工作浓度为250μg/mL的头孢霉素(KD1762)抑制农杆菌的生长。
3．4℃避光春化2到3天，移入22℃恒温箱培养。
4．观察种子在固体筛选培养基上生长情况，相比于其他萌发的幼苗，具有长根的幼苗可确定为转化子时，将转化子移栽至浇透拟南芥营养液(KD2095)的人工基质上培养。
相关搜索：1000×拟南芥营养液(3种母液，除菌)，Arabidopsis thaliana nutrient salts Solution